Группа крови определение цоликлонами

Правила определения группы крови цоликлонами Очень часто определение группы крови выполняется цоликлонами. Цоликлоны подразделяются на анти-А и анти-В. Их использование.

Правила определения группы крови цоликлонами



Очень часто определение группы крови выполняется цоликлонами. Цоликлоны подразделяются на анти-А и анти-В. Их использование в медицине популярно из-за возможности определения не только группы крови.

Оглавление:

Резус они также демонстрируют. Для этого используется система АВО, которая заменяет обычные сыворотки, основой которых является агглютинирующий изогем.

Чтобы определить группу или резус, реагентами осуществляется поиск указанных выше антигенов, которые присутствуют в эритроцитах. Для этого применяются антитела стандартного типа. Также стандартными эритроцитами выявляются агглютины, вне зависимости от того, используется плазма или специальная сыворотка для исследования. Когда речь идет об анализе донорских образцов, требуется в обязательном порядке определить также и присутствие в сыворотке агглютининов. Применяются для этого эритроциты стандартного типа.

В качестве основы цоликлонов используются гибридомные линии клеток. Получаются они в результате совмещения антителообразующих В-лимфоцитов мышиного происхождения с клетками миеломы того же живого организма. С помощью гибридомов, которые являются индивидуальными, продуцируются антитела гомогенного типа. При этом может быть в итоге только один иммуноглобулический класс. Эти вещества почти полностью повторяют структуру и активность с биологической точки зрения.

Подготовка к работе

Чтобы определить цоликлонами группу крови и резус, существует специальный алгоритм. Такая техника работы предполагает лабораторное определение. В лаборатории должны поддерживаться определенные температурные показатели – в пределах от 15 до 25 градусов по Цельсию. Кроме этого, требуется хорошее освещение.



Для хранения всех реагентов используются плотно закрытые сосуды. Это необходимо, чтобы не допустить высыхания. В результате этого процесса может серьезно снизиться активность антител.

Для работы запрещено пользоваться мутными с присутствием хлопьев реагентами. Используется для работы индивидуальная пипетка. Для проведения процедуры предполагается использование планшета, окрашенного в белый цвет с хорошо смоченной поверхностью. За счет такого фактора, как высокая авидность и активность цоликлонов, достаточно одной реагентной серии для использования.

Чтобы выполнить исследование на группу крови, предварительно нужно подготовить все оборудование и реагенты. В частности:

  • подготавливается типовая тарелочка, сухая, на ней будет выполняться весь анализ;
  • подготавливаются цоликлоны обоих типов, а также две пипетки для работы с каждым по отдельности и две палочки, выполненные из стекла, которыми выполняется перемешивание;
  • потребуется одноразовый шприц с иглой, которой осуществляется забор крови.

В лоток, прошедший стерилизацию, выкладываются три шарика, которые предварительно смачиваются спиртом, а также три стерильные салфетки. Для забора потребуется резиновый жгут. Сбор осуществляется в пробирку центрифужного типа без какой-либо жидкости. На ней с помощью стеклографа требуется отчетливо прописать фамилию пациента. Кроме этого, заполняется бланк, который служит лабораторным направлением. Врач-лаборант повторно определит все основные показатели и поставит печать и подпись.

Определение результатов

Чтобы получить верный результат анализа, требуется провести внутривенную пункцию с соблюдением всех правил по забору. Достаточно для определения будет пяти миллилитров.



Цоликлоны анти-А и анти-В в условиях лаборатории наносятся на планшеты. Потребуется одна большая капля. Каждая помечается соответствующими надписями. Рядом с ними необходимо нанести капли крови в небольшом количестве.

Индивидуальная палочка из стекла служит для перемешивания образца и реагентов. Соотношение крови к реагентам должно составлять один к десяти. Для наблюдения реакции достаточно двух с половиной минут.

Всего пяти минут при помешивании капель достаточно для наблюдения результата. Он должен быть оценен врачом. Таблица, расположенная ниже, содержит результаты, на которые стоит ориентироваться при работе с сывороткой при использовании эритроцитов стандартного типа.

Определение группы крови с помощью цоликлонов — алгоритм и интерпретация результатов

Определение группы эритроцитарных антигенов и резус-фактора давно стало одним из обязательных исследований для большинства пациентов, поступающих на стационарное лечение. Его проведение возможно на любом уровне оказания медицинской помощи при условии наличия необходимых реагентов и инструментов.

Обычно, определение группы проводится с помощью стандартных сывороток, хотя, конкуренцию ему составляет еще один метод, сходный по методике проведения с эталонным – использование цоликлонов.



Что это такое?

Цоликлон – моноклональное антитело, образующееся путем генной инженерии. Чаще всего, для его получения используют мышей – животному вводят специальный антиген, а после получают асцитную жидкость грызуна, в которой и содержатся указанные антитела.

Морфологически, они относятся к иммуноглобулинам класса М, т.е. антителам острой фазы. Механизм действия их обусловлен образованием комплекса антиген-антитело, где в качестве антигена выступают некоторые молекулы (в данной ситуации – белки, определяющие группу крови и ее резус), расположенные на мембране клетки.

Какие существуют препараты цоликлонов?

В настоящее время, в лабораторной диагностике используется 3 типа стандартных цоликлонов – анти-А, анти-В и анти-АВ. Каждый из них вступает в реакцию со специфичным для него антигеном, обуславливая развитие иммунной реакции.

Эти препараты выпускаются в виде ампул или флаконов, содержащих 5 или 10 мл раствора антител. Все они имеют специфическую окраску, по которой и проводится определение каждого типа:

  • анти-А окрашен в красный цвет;
  • анти-В выпускается в виде раствора синего цвета;
  • комбинированный цоликлон анти-АВ (или анти-D) специфической окраски не имеет.

Цоликлон анти-АВ может быть модифицированным и использоваться для определения резус фактора.



Методика исследования

Алгоритм исследования достаточно прост, специальной подготовки к исследованию от пациента не требуется.

Определение группы может проводиться в нативной крови как с использованием консерванта, так и без него. Для исследования берут капиллярную кровь из пальца пациента.

Обязательно соблюдать условия окружающей среды для получения достоверной информации: анализ проводится в хорошо освещенном помещении с умеренной влажностью и температурой не ниже 20 градусов.

Кроме того, следует удостовериться, что кровь была взята у пациента правильно, а срок годности используемых реагентов еще не истек.

На специальную пластину (или планшетку), на расстоянии друг от друга с помощью специальной пипетки наносят по 1 крупной капле каждого из антител (для удобства, лучше располагать их так – А, В, АВ). Возле каждой из капель цоликлонов необходимо поместить по одной капле исследуемой крови и при покачивании планшетки постепенно их перемешать.

Визуально, результаты исследования можно определить уже через 5-10 секунд после начала анализа. В исследуемой крови обнаруживаются так называемые “красные конгломераты” – склеившиеся эритроциты. Образуются они в результате реакции агглютинации, т.е. в том случае, когда цоликлон соответствует антигену (в том числе и при исследовании на резус-фактор). Если же агглютинации не наблюдается, то соответственно имеется расхождение между исследуемыми антигенами и имеющимися антителами.



Интерпретация результатов

Как проводится оценка результатов исследования и определение групповой принадлежности?

Как уже говорилось выше, результат исследования определяется по наличию реакции агглютинации визуально или с помощью анализаторов:

  • если ее нет ни в одной из капель, значит исследуемая кровь имеет первую группу.
  • когда она наблюдается в ячейке, где расположен цоликлон анти-А, значит в исследуемой крови содержится данный антиген. Таким образом, исследуемая кровь может быть как второй (генотип АА или А0) или 4 (АВ) групп.
  • если агглютинация наблюдается с цоликлоном анти-В, то исследуемая кровь 3 (ВВ, В0) или 4 группы.

Для проверки правильности результатов на планшетке и добавляется цоликлон анти-АВ (обладающий свойством определять и резус-фактор). Он, в какой-то мере является контрольным, так как именно по наличию в нем агглютинатов судят о правильности проведенного анализа. Если реакция произошла во всех ячейках, значит исследуемый образец относится к 4 группе крови.

Возможна ситуация, когда агглютинация наблюдается с цоликлоном анти-АВ, а в других образцах ее нет. В таком случае можно говорить о неправильно проведенном анализе, и проводят повторное определение группы и резус-фактора.

Б. Определение группы крови с помощью цоликлонов (моноклональных антител)

Используются стандартные наборы моноклональных антител высокой специфичности, содержащие реагенты (цоликлоны) анти-А, анти-В и анти-АВ. Для каждого определения группы крови достаточно применять по одной серии реагентов (цоликлонов) анти-А и анти-В.

На маркированную пластинку капают в три точки, исследуемые эритроциты (0,02 мл). Рядом с ними, под соответ­ствующими надписями, помещают цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ по одной капле (0,1 мл) в соотношении 1:5. 1:6. После смешивания реагентов и крови стеклянными палочками (уголками предметных стекол), пластинку периодически покачивают, ход реакции наблюдают в течение 3 мин.

Оценка результата проводится по наличию агглютинации эритроцитов с соответствующим реагентом.

Возможны четыре варианта определения результатов:

а) Агглютинация во всех трех каплях цоликлонов – это значит, что исследуемые эритроциты содержат оба антигена (А и В) и кровь принадлежит к группе АВ (IV). В целях исключения панагглютинации, которая может наблюдаться у отдельных больных (миеломная болезнь, ожоговая болезнь), а также в пуповинной крови новорож­денных, в случае установления группы крови АВ (IV) необходимо провести контрольное исследование: одну каплю (0,1 мл) изотонического раствора натрия хлорида смешать с маленькой каплей (0,01 мл) исследуемой крови. Реакция агглютинации должнаотсутствовать.

б) Агглютинация с цоликлонами анти-А и анти-АВ – это означает, что исследуемые эритроциты содержат только антиген А и кровь принадлежит к группе А (II).



в) Агглютинация с цоликлонами анти-В и анти-АВ – это означает, что исследуемые эритроциты содержат только антиген В и кровь принадлежит к группе В (III).

г) Агглютинация отсутствует во всех трех каплях цоликлонов — это значит, что исследуемые эритроциты не содержат антигенов А и В, и кровь принадлежит к группе 0(I).

Оценка результатов определения групп крови при помощи цоликлонов приведена в таблице:

Определение группы крови цоликлонами: алгоритм

Все в организме человека обусловлено выработкой различных веществ. Не исключением является и группа крови, тип которой зависит от антигенного состава эритроцитов.

Современная медицина быстро развивается, и определение группы крови уже давно не в новинку. Существует множество методов ее определения. Одним из наиболее широко распространенных является определение группы крови цоликлонами.



Что это такое?

Цоликлоном называют специальное антитело, реагирующее с антигенами, расположенными на поверхности мембран эритроцитов. Для их получения используют методы генной инженерии – вначале получают специальные бактерии, которые вводят в организм мышей. После иммунизации организма мыши получают ее асцитную жидкость, из которой впоследствии и выделяют необходимые антитела.

Они представляют собой иммуноглобулины класса М.

Благодаря особой технологии изготовления, цоликлоны безопасны для человека в эпидемиологическом плане.

Вещество выпускается в виде водно-солевого раствора, который добавляют к имеющимся образцам крови. Для каждой группы антигенов имеется собственный раствор цоликлона – анти-А цоликлон имеет розовую окраску, анти-В – голубую, а цоликлон анти-D бесцветен.

Свое название препараты получили от названия места, где они были созданы – Центральный ордена Ленина институт переливания крови в Москве.



Методика определения

Определение группы крови цоликлонами может проводиться в нативной крови с добавлением консерванта или без него, а также при исследовании капиллярной крови, взятой из пальца. Непосредственно определение группы проводится на специальной пластине или планшете.

В первую очередь, на планшет наносится капля раствора цоликлона под соответствующей пометкой. Рядом с раствором цоликлона наносится капля исследуемой крови, и они смешиваются между собой. Определение группы крови цоликлонами проводится при равномерном покачивании пластины из стороны в сторону. Визуально, наблюдается агглютинация эритроцитов (слипание их между собой). Если результат отрицательный, агглютинации не происходит.

Процедура обязательно проводится при соблюдении определенного температурного режима – от 15 до 25 градусов тепла при нормальной освещенности. Перед проведением процедуры следует убедиться, что срок годности цоликлонов не истек.

В некоторых учреждениях с целью контроля за препаратами обязательно следует зафиксировать время открытия средства и срок его годности. Рекомендуется документально отразить срок годности реагента, если проводится определение группы крови цоликлонами. Фото используемых флаконов делают редко, однако подобная фиксация также возможна.

Интерпретация результатов

После проведения теста уже можно узнать, какая же группа крови у пациента.

Каковы же результаты исследования, если проводилось определение группы крови цоликлонами? Таблица сопоставления цоликлона и группы крови позволяет разобраться в полученных результатах.



Как видно из таблицы, если агглютинация произошла в ячейке пластины под номером 3 или 4, значит, кровь второй группы (агглютинация осуществилась за счет взаимодействия антигена А, расположенного на мембране эритроцита, и специального антитела, присутствующего в растворе анти-А-цоликлона). Соответственно, если агглютинация наблюдается в ячейке номер 5 или 6, то и группа крови – третья. Если агглютинации не произошло ни в одном указанном секторе, значит, исследуемая кровь не имеет антигенов, на что напрашивается вывод, что группа крови – первая.

Возможно, что агглютинация происходит во всех лунках. Обычно, это говорит о некачественном препарате либо нарушении правил проведения исследования.

Для чего проводится определение группы крови цоликлонами?

В настоящее время цоликлоны используются преимущественно для определения группы крови и резус-фактора. Исследование может проводиться как планово, по назначению участкового врача-терапевта, так и по экстренным показаниям, когда требуется переливание крови (в ходе операции произошла массивная кровопотеря или пациент был доставлен с обширной травмой и массивным кровотечением).

В поликлинике определение группы проводится преимущественно за счет использования сывороток. Группа крови по цоликлонам определяется чаще всего в стационаре или специализированных лабораториях.

К использованию цоликлонов прибегают, обычно, при невозможности использования сывороток.



Скорость получения результатов несколько быстрее, чем при исследовании стандартными сыворотками, что делает методику более универсальной. Многие лаборатории стремятся перейти на использование данного метода.

Препараты цоликлонов

Какие же есть разновидности цоликлональных препаратов?

Выделяют эритротест-цоликлон анти-D (есть три разновидности – супер, вызывающая прямую агглютинацию, просто анти-D-цоликлон, при добавлении которого развивается непрямая агглютинация, и анти-D-микс препарат, имеющий в своем составе компоненты первых двух). Они позволяют не только определить группу крови цоликлонами, но и выявить резус-принадлежность.

Другие растворы отличаются сугубо по названию, так как входящие в них антитела – иммуноглобулины классов М и G позволяют только типировать кровь по стандартным, АВ0, антигенам. Различие между ними заключается только в механизме слипания эритроцитов (прямая или непрямая агглютинация).

Каждый из данных препаратов имеет срок годности и особенности использования. Однако наибольшее распространение в клинической лабораторной диагностике получили только три препарата, указанные выше (анти-А, анти –В, анти-D).



Неправильная трактовка результатов

Иногда возможно получение ложных, недостоверных результатов. Например, агглютинация произошла во всех ячейках планшетки или при добавлении крови к препарату, например, изменился их цвет.

Чтобы предотвратить подобные результаты, если проводится определение группы крови цоликлонами, алгоритм процедуры предусматривает некоторые правила. В первую очередь следует обратить внимание на срок годности цоликлонов. Реагенты с истекшим сроком обращения использовать недопустимо.

Обязательно следует соблюдать и условия проведения процедуры. В помещении должно быть оборудовано рабочее место с достаточным освещением и температурным режимом. Если в инструкции к препарату описана и необходимая влажность в помещении, необходимо учитывать и ее.

Немаловажным является и чистота рабочей планшетки, загрязнение которой часто приводит к ошибкам в исследовании и получению неправильных результатов.

Где можно провести исследование?

Определение группы крови цоликлонами получает все большее распространение. Если раньше данная процедура проводилась только в специализированных стационарах (например, сугубо в отделениях хирургии и гематологии), то сейчас данная процедура доступна практически в любой оборудованной лаборатории.



Данная методика начинает распространяться и в поликлинической сети для экспресс-определения группы крови и скорейшего выставления диагноза пациенту.

Многие центры частной медицины и косметологии предлагают проведение данной услуги на платной основе. Бесплатно процедура, как уже было сказано, проводится при наличии направления терапевта.

Если нет возможности обратиться в поликлинику, то как определить группу крови по цоликлонам? При наличии дома специальной планшетки и набора препаратов, исследование можно проводить и самостоятельно, помня, однако, о необходимости соблюдения условий процедуры и особенно – стерильности.

Определение группы крови и резус-фактора с помощью цоликлонов

Цоликлоны – это моноклинальные антитела, полученные путем генной инженерии из крови стерильных мышей и применяемые для определения группы крови системы АВО. В отличие от стандартных сывороток, цоликлоны отличаются очень высокой активностью и авидностью, то есть временем наступления и выраженностью реакции агглютинации (склеивания). Основными цоликлонами являются: анти-A, анти-B, анти-AB, анти-0 и другие. По ним определяют группы крови и резус-фактор.

Как проводится

Определение группы крови данным методом проводится в лаборатории. Температура воздуха в помещении должна составлять от +15 до + 25 градусов C. Исследование должно проходить при хорошем освещении. Все реагенты нужно хранить плотно закрытыми, поскольку при высыхании активность антител значительно снижается. Нельзя использовать мутные и содержащие хлопья реагенты. Для каждого из них нужна отдельная пипетка. Процедура проводится на планшете или тарелке белого цвета, поверхность которых должна хорошо смачиваться. Благодаря высокой авидности и активности цоликлонов, есть возможность применения по одной серии анти-A и анти-B реагентов.



На планшете делают надписи: анти-A и анти-B. Под соответствующие надписи капают цоликлоны в количестве примерно 0,1 мл. Реагент анти-A имеет желтовато-розовый цвет, анти-B – синий. Рядом с моноклональными антителами капают по капле крови и смешивают ее с реагентами стеклянной палочкой или уголком предметного стекла. Перед смешиванием следующей пары капель палочку или стекло тщательно промывают и вытирают насухо.

На протяжении 2,5 минут ведут наблюдение за агглютинацией, при этом планшет слегка покачивают. Затем оценивают результат. Надо сказать, что для наблюдения за процессом не требуются никакие приспособления. Агглютинаты хорошо видны невооруженным глазом, они быстро сливаются и образуют большие хлопья. Если склеивания не происходит, капля реагента равномерно окрашивается в красный цвет.

  1. Если агглютинация отсутствует (и с цоликлоном анти-A, и с анти-B), в эритроцитах нет ни антигена A, ни B. Это I группа.
  2. Если агглютинация есть лишь с цоликлоном анти-A, в эритроцитах содержится только антиген A. Это кровь II группы.
  3. Если агглютинация наблюдается лишь с цоликлоном анти-B, в красных клетках есть только антиген B. Это III группа.
  4. Если агглютинация произошла c цоликлоном и анти-A, и анти-B, в эритроцитах есть оба антигена. Для исключения аутоагглютинации проводят контрольную процедуру: смешивают изотонический раствор натрия хлорида (0,1 мл) и исследуемую кровь (0,01 мл). Если агглютинация отсутствует, то это IV группа.

Определение резус-фактора

Цоликлоны имеют ряд преимуществ перед стандартными сыворотками

На планшет наносят большую каплю реагента анти-D-супер. Рядом – маленькую (в 10 раз меньше) исследуемой крови, которую смешивают с реагентом и оценивают результат. Если началась агглютинация, кровь является резус-положительной, при отрицательном резус-факторе агглютинации не происходит.

В заключение

Моноклональные реагенты для определения группы крови имеют явные преимущества по сравнению со стандартными изогем-агглютинирующими сыворотками. Они обеспечивают очень точный результат, а сама процедура безболезненна, безопасна и занимает очень мало времени.

Как определяют группы крови с помощью цоликлонов, и насколько это достоверно?

Кровь человека – уникальная жидкость. Ее удивительный состав и свойства остаются предметом для внимательного изучения ученых и медиков. Определение группы крови цоликлонами – один из новых способов. В чем заключается данная методика? Возможно ли определение резус-фактора цоликлонами? Что это за сыворотка? Как быстро можно получить ответ после лабораторного исследования?



Общая информация о цоликлонах

Чтобы понять, как используются цоликлоны для определения группы крови, необходимо разобраться, что это такое, и почему данный способ эффективен.

Цоликлоны – препараты, полученные из крови стерильных мышей. Они применяются исключительно для определения группы крови по системе АВО. С помощью данных средств можно определить как группу, так и резус фактор.

Проведение процедуры

Проводить процедуру определения группы крови цоликлонами, алгоритм которой описан ниже, принято в лабораторных условиях. Это связано с тем, что хранение препаратов и компонентов требует особых условий, которых невозможно достичь в быту.

Процедура проводится с соблюдением некоторых условий:

  • температура в помещении должна быть в пределах отградусов;
  • каждый отдельный реагент должен храниться в плотно закрытой емкости;
  • лаборатория должна быть хорошо освещена;
  • если реагент для проведения процедуры помутнел, он непригоден;
  • если в нем наличествует осадок, применять препарат нельзя.

Чтобы благодаря этому анализу получить достоверные сведения, необходимо тщательно к ней подготовиться.



Подготовительные меры

Перед тем как начать определение группы крови с помощью цоликлонов, нужно заранее приготовить все необходимые инструменты, реагенты и биоматериал. Важно соблюсти все условия процедуры. Только так можно рассчитывать на получение достоверных сведений.

Определение группы крови по цоликлонам проводится, если есть такое оснащение:

  • сухой планшет, тарелка или предметное стекло для проведения подобных манипуляций;
  • цоликлоны анти-А и анти-В;
  • две стерильные пипетки для разных цоликлонов;
  • две стеклянные палочки;
  • стерильный шприц для забора биоматериала;
  • несколько ватных тампонов;
  • стерильные салфетки;
  • спирт;
  • жгут;
  • физраствор.

На сухой пробирке должна быть отметка с фамилией исследуемого пациента. Бланк, который выдан врачом, должен быть правильно заполнен лаборантом. В нем должно быть описание о группе, резус факторе. Внизу ставят печать и подпись врача.

Проведение процедуры

Алгоритм определения группы крови с помощью цоликлонов состоит в следующем.

Вначале у пациента проводится забор кровеносной массы для проведения исследования. Обычно это делается с помощью одноразового пяти кубового шприца. Затем проводят такие манипуляции:


  • на планшет для процедуры наносят по крупной капле цоликлонов каждой категории;
  • предварительно важно маркером точно подписать, в какую часть планшета какие реагенты нанесены;
  • рядом ставят каплю небольшого объема взятой на исследование кровеносной жидкости;
  • на проявление результата отводится 2-3 минуты.

Чтобы проанализировать результат, в течение нескольких минут приводится помешивание реагентов с биоматериалом разными палочками. Лаборант внимательно наблюдает за реакцией агглютинации.

Положительной считается реакция в случае, если агглютинация (склеивание) состоялось. Агглютинаты представляют собой небольшие склеенные агрегаты красного цвета и мягкой природы. Если реакция отрицательная, склеивания не происходит, а кровеносная жидкость остается равномерной по структуре, ровного красного цвета.

Внимание! Определение группы крови по цоликлонам – достоверный метод, чтобы узнать свою группу и резус фактор. Стандартный набор процедуры включает лишь несколько манипуляций, требует немного времени и считается малозатратным способом. Схема проведения процедуры всегда одинакова. Чтобы точно узнать свою группу, манипуляции должен проводить только квалифицированный специалист.

Расшифровка полученных данных

Техника определения группы крови с помощью цоликлонов считается достоверной, и результат можно получить в кратчайший срок. Таблица прохождения агглютинации позволяет понять, как правильно расшифровать полученную в процессе процедуры информацию.

Если ни с одним из используемых в процессе процедуры реагентов агглютинация не произошла, для анализа была получена кровь первой группы, в которой нет антигенов А или В.



Если в процессе смешивания исследуемой массы с цоликлонами анти-А произошло склеивание, речь идет о второй группе крови, в которой содержатся антигены А.

Склеивание цоликлонов анти-В с компонентами крови при смешивании их с кровью пациента свидетельствует о том, что для процедуры сдана кровь третьей группы, в которой содержатся антигены В.

Если произошла агглютинация фрагментов крови с обоими видами реагентов, скорее всего, манипуляция проводится с участием четвертой группы. Для подтверждения данного предположения применяется специальный цоликлон анти-АВ.

Определение резус-фактора цоликлонами

Для проведения процедуры применяется только венозная кровь. Направление на процедуру выдает врач-гематолог. Действие препарата ожидается в течение нескольких минут. В комплект с препаратом идет инструкция, которая дает общее представление о проведении процедуры и о порядке расшифровки полученных данных.

Для определения резус-фактора нужно провести такую процедуру:


  • каплю крови смешивают с моноклональным реагентом;
  • слабый эффект агглютинации отмечается уже черезсекунд;
  • полное склеивание возможно только через минуту.

Реакция агглютинации показывает, есть ли резус-фактор+. При положительной крови агглютинация наступает всегда. Если этот процесс не развивается, резус отрицательный.

Итак, мы рассмотрели определение группы крови и резус-фактора цоликлонами (алгоритм процедуры). Применение данного способа широко распространено в медицинских учреждениях разных стран. Если манипуляция проводится в лабораторных условиях с соблюдением всех правил, можно получить достоверные сведения о группе крови и резус-факторе.

Алгоритм определения группы крови цоликлонами

Цоликлоны – антитела, которые получают благодаря генной инженерии, из крови мышей, полностью стерильных. Такая технология применяется для определения групповой принадлежности крови. Цоликлоны для определения групп крови имеют высокую активность, благодаря чему наступает быстрая реакция склеивания. Антитела А,В, АВ, 0 определяют группу и резус — фактор. Определение группы крови цоликлонами проводится строго в лаборатории.

Правила тестирования

Исследование крови необходимо проводить в помещении не выше 25 градусов. Очень важно, чтобы все реагенты были плотно закрыты, так как если цоликлоны высыхают, их активность сильно снижается.

Такое тестирование на определение групп крови очень часто назначают для стационарных больных, достаточно иметь необходимые инструменты и реагенты. Медики проверяют кровь на ее групповую причастность с использованием распространенных сывороток, однако цоликлонам отдают большее предпочтение, так как такой способ является быстрым и эффективным.

Антитела цоликлоны считаются иммуноглобулином, иначе говоря, являются антителами острой фазы.

На сегодняшний день широкое применение получили антитела в крови А, В, АВ. Благодаря реакции с антигеном они образуют развитие реакции иммунной.

Препараты цоликлонов

Цоликлоны производят в ампуле не более 5-10 мл, каждый антиген имеет свою окраску:

Цоликлоны для типирования групп крови

  • Антитела А – красного цвета.
  • Антитела В – синего цвета.
  • Антиген АВ – обесцвечен.

Последний антиген из списка используется для определения резус – фактора крови.

Проведение

Для того, чтобы произвести исследования на группу крови человека, пациенту не нужно выполнять ни каких действий. Медицинскому работнику достаточно взять кровь из пальца.

При исследовании крови очень важно хорошее освещение и условия окружающих факторов. Реагенты должны иметь действующий срок годности, а кровь, взятая, у пациента отвечала всем нормам.

Для того, чтобы определить группу крови цоликлонами используют специальный алгоритм:

Необходима таблица с заранее высушенными реагентами, которым присвоено свое место, по несколько капель добавляют воды, после чего по капле крови добавляют на каждый цоликлон, и перемешиваются аккуратно специальным инструментом. После проведенной процедуры, результат анализа крови можно заметить уже через 15 секунд, на таблице проявятся склеившиеся эритроциты. Если же склеивание крови не происходит, значит, существует расхождение между антителами и антигенами, расшифровка анализа крови на определение группы происходит достаточно быстро.

Чтобы полностью установить результат исследований необходимо использовать анализатор:

  • Если реакция не наблюдается ни в одной таблице, значит у пациента первая группа крови.
  • Если реакция наблюдается возле цоликлона А, то значит пациент обладатель 2 группы крови или 4.
  • Если реакция происходит возле цоликлона В, то значит пациент имеет 3 группу крови ил 4 группу.

Таблица показателей реакции цоликлонов

Расшифровка

Следующую процедуру проводят для уточнения резус-фактора, а также устанавливают правильность выше установленных показателей, такую процедуру проводят, используя цоликлон АВ. Если положительная реакция происходит во всей таблице, можно смело сказать, что у человека 4 группа крови. В большинстве случаев возникает ситуация в которой цоликлон АВ не дал никакой реакции, это значит, что анализ выполнен не правильно, и следует провести повторное исследование на определение резус фактора, а также группы крови.

Результаты тестирования крови цоликлонами

Сегодня достаточно распространенными являются специальные карточки, которые позволяют провести исследования и в домашних условиях. Такой материал герметично упакован и является полностью стерильным.

Достаточно вскрыть упаковку и поднести уже проколотый палец, капнуть кровь и подождать несколько секунд. Такой метод является достаточно быстрым для установки результата, а также является очень достоверным. Наиболее удобным такое тестирование крови является в экстренных ситуациях.

Цоликлоны для определения группы крови у человека имеют огромное преимущество перед обычными сыворотками и способны обеспечить высокую точность результата. Забор крови на исследование в лабораторию берется у пациента в любое время. Такая процедура достаточно быстрая и безболезненная, безопасная, занимающая малое количество времени.

Исследование крови на групповую принадлежность проводят в специальных лабораториях, и только специалистами. Выполнение такой процедуры в домашних условиях возможно, но является достаточно проблематичной. Узнать группу крови можно, обратившись в больницу, каждый человек обязан ее знать, так как бывают разные жизненные ситуации.

Что такое цоликлоны? Как с их помощью определить группу крови и резус-фактор

Цоликлоны – моноклинальные антитела, которые были получены из крови мышей с помощью генной инженерии и используются для определения группы крови системы АВО и резус-фактора.

Цоликлоны, в противовес стандартным сывороткам, отличаются высокой активностью и авидностью (временем наступления, а также выраженностью склеивания (реакции агглютинации).

По цоликлонам определяют резус-фактор и группы крови.

Техника определения групп с помощью цоликлонов

Определение данным методом производится в лабораторных условиях. Температура воздуха должна находиться в пределах +15 – + 25 градусов по Цельсию. Исследование должно проводиться при достаточно хорошем освещении.

Реагенты необходимо хранить плотно закрытыми, так как при высыхании значительно снижается активность антител. Нельзя использовать содержащие хлопья и мутные реагенты. Для каждого из реагентов требуется отдельная пипетка.

Анализ проводится на белой тарелке или планшете с хорошо смачиваемой поверхностью. Благодаря высокой активности и авидности цоликлонов, есть возможно применение по серии реагентов анти-A и анти-B.

На планшете нужно сделать надписи с названиям антигенов анти-A/анти-B. Далее снизу от соответствующих надписей капают примерно 0,1 миллилитр цоликлонов. У реагента анти-A цвет желтовато-розовый, у анти-B – синий.

Определение групп крови

Возле моноклональных антител капают по одной капле крови, смешивают ее уголком предметного стекла или стеклянной палочкой с реагентами. Перед дальнейшим смешиванием пар капель необходимо тщательно промыть и насухо вытереть стекло или палочку.

Наблюдение за процессом агглютинацией ведут в течение 2,5 минут, при этом тарелку или планшет нужно слегка покачивать. По истечении времени оценивают результат. Стоит отметить, что наблюдения за агглютинацией не требуют каких-либо специальных приспособлений.

Агглютинаты достаточно хорошо видны даже невооруженным глазом, быстро сливаясь и образуя большие хлопья. В случае, если не происходит склеивания, капля реагента приобретает равномерную окраску красного цвета.

Расшифровка результатов

Таблица сопоставления группы крови и цоликлона позволяет разобраться в результатах.

  1. Если отсутствует агглютинация (с анти-A и анти-B), эритроциты не содержат антигенов A и Б. Это I группа крови;
  2. Если есть агглютинация только с анти-A, эритроциты содержат лишь антиген A, что характеризует II группу крови;
  3. Если агглютинация только с анти-B, красные клетки содержат антиген B, что характеризует III группу;
  4. Если наблюдается агглютинация c обоими цоликлонамми анти-A и анти-B, эритроциты содержат оба антигена. С целью исключения аутоагглютинации необходимо провести контрольную процедуру: в этом случае смешивают 0,1 миллилитр изотонического раствора хлорида натрия и 0,01 миллилитр исследуемой крови. Если реакция агглютинации отсутствует, определяется IV группа.

Расшифровка результатов к содержанию ↑

Определение резус-фактора

Для определения резус-фактора наносят на планшет большую каплю анти-D-супе, возле нее – маленькую каплю (меньше в десять раз) исследуемой крови. Производят смешивание и оценивают полученный результат. Если реакция агглютинации началась, данная методика определяет кровь как резус-положительную, если резус-фактор отрицательный – агглютинации нет.

Препараты цоликлонов

Выделяют эритротест-цоликлон анти-D.

Существуют три разновидности:

  • Обычный анти-D-цоликлон. При его добавлении развивается реакция непрямой агглютинации;
  • Супер. Вызывает прямую агглютинацию;
  • Препарат анти-D-микс, имеющий в составе компоненты обычного и супер цоликлона анти-D). С их помощью можно как выявить группу крови, так и определить резус-принадлежность крови.
Отличие других растворов состоит в названии, поскольку входящие в их состав антитела – иммуноглобулины М и G – предоставляют возможность только произвести типизацию крови по антигенам АВ0. Различие заключается исключительно в механизме слипания эритроцитов (агглютинация прямая/непрямая).

У каждого из этих препаратов есть свои собственные особенности использования и срок годности. Однако наибольшей популярностью в лабораторной клинической диагностике пользуются только 3 вышеуказанных препарата (анти-А, анти-В, анти-D).

Как определить группу в случае неверной трактовки результатов анализа

Иногда возможно получение недостоверных, ложных результатов. К примеру, если при добавлении к препарату крови изменился их цвет или если агглютинация наблюдается во всех ячейках планшетки.

Чтобы предотвратить такие результаты, если выполняется определение группы цоликлонами, алгоритм действий предусматривает определенные правила. Сначала следует посмотреть на срок обращения цоликлонов. Недопустимо использовать реагенты, у которых истек срок годности.

Обязательно нужно соблюдать и все условия правильного проведения процедуры. Помещение должно иметь хорошо оборудованное рабочее место с температурным режимом и достаточным освещением. Если инструкция к препарату содержит указания и касательно требуемой влажности, следует учитывать и данный фактор.

Немалое значение имеет и чистота планшетки, так как ее загрязнение может привести к возникновению ошибок в исследовании и, как следствие, к получению неверных результатов.

Где можно провести анализ?

Определение группы цоликлонами постепенно приобретает все большую популярность. Если раньше эта процедура проводилась исключительно в специализированных стационарах (к примеру, только в отделениях гематологии и хирургии), то сейчас процедура доступна почти в любой достаточно оборудованной лаборатории.

Методика цоликлонов находит применение и в поликлиниках. Там ее включают различные методы экспресс-определения группы крови, проводимые с целью скорейшего выставления пациенту диагноза.

На платной основе проведение этой услуги предлагают и многие центры косметологии и частной медицины. Бесплатно данная процедура, как было сказано выше, проводится по направлению терапевта или лечащего врача.

Если отсутствует возможность обратиться за анализом крови в поликлинику, исследование можно провести и самостоятельно при наличии набора препаратов и специальной планшетки. Однако необходимо помнить, что для получения достоверных результатов требуется соблюдать условия процедуры, в особенности это касается стерильности.

Как производится определение группы крови цоликлонами

Цоликлоны, как бы ни звучало это непонятное название, представляют собой лишь моноклональные антитела, помещенные в солевой раствор. Названием отдали должное месту работы изобретателей растворов – цоли (Центральный Ордена Ленина Институт). Ныне это Гематологический научный центр.

Препараты, названные цоликлонами применяются в качестве реагентов для определения группы крови и ее резус-фактора . Поставляются цоликлоны в пластиковых флаконах по 10 мл. или же в стеклянных (5 мл) в жидком виде. Флаконы для удобства снабжены капельницами.

Метод определения группы крови цоликлонами прост и точен. По этой причине он используется как основной.

Что такое цоликлоны

Принцип действия заключается в соединении с агглютиногенами – химическими компонентами, находящимися на верхнем слое определенных эритроцитов. В зависимости от реакции становится возможным определение группы крови цоликлонами. О наличии в составе агглютиногена А говорит реагент анти-А, соответственно, агглютиноген B выявляют с помощью вещества анти-B.

Отметим, что цоликлоны являются достаточно универсальным инструментом. Они позволяют определять группу крови как в системе AB0 (с использованием реагентов анти-А (красная жидкость) и анти-B (синяя жидкость)), так и в системе резус (с использованием реагента анти-D (прозрачная жидкость)).

Определение группы крови цоликлонами

Чтобы узнать ГК, используя цоликлоны, необходимо взять изделие с плоской поверхностью (планшет), сами реагенты и две капли крови. Для анализа подходит практически любая жидкость независимо от состояния (законсервированная или без консерванта) и способа забора (из вены/пальца). Перед нанесением на поверхности планшета делаются пометки, показывающие, где будет использоваться тот или иной цоликлон.

После подготовки поверхности лаборант наносит на нее по крупной капле реагента: обычно анти-А располагают слева, а анти-B – справа. Затем к веществу добавляют по кровяной капле, ее размер должен быть десятикратно меньше объема нанесенной жидкости.

Планшет требуется осторожно раскачивать из стороны в сторону, чтобы цоликлоны и кровь перемешались, но капли с разными реагентами не слились друг с другом. Спустя несколько минут можно наблюдать полное соединение жидкостей либо реакцию агглютинации, когда эритроциты склеиваются, а и наступает свертывание.

Результаты исследования расшифровывают следующим образом:

  • Отсутствие агглютинации в обоих случаях определяет первую группу.
  • Сворачивание при воздействии цоликлона анти-А говорит о том, что кровь относится ко второй группе.
  • Агглютинация в капле с реагентом анти-B – признак третьей группы.
  • Выпадение осадка в обоих каплях говорит о принадлежности к четвертой группе.

В случае появления последней реакции данные требуется проверить с помощью повторных анализов: кровяная капля смешивается с цоликлоном анти-AB, появление агглютинации подтвердит результат первого исследования. Вторая проверка исключает склеивание эритроцитов неспецифичного типа, которое может произойти при наличии ряда тяжелых болезней.

В рамках второго исследования кровь добавляют в раствор хлорида натрия: если жидкость относится к четвертой группе, положительной реакции на физраствор быть не должно, иначе речь идет о наличии заболевания, меняющего свойства кровяных телец.

Определение резус-фактора

  • На поверхность планшета наносится приблизительно 0,1 мл реагента.
  • Рядом капают 0,01 исследуемой крови.
  • Цоликлон и изучаемую жидкость смешивают специальной стеклянной палочкой, каждые полминуты планшет необходимо покачивать.

При склеивании и выпадении осадка из эритроцитов кровь считается резус-положительной, а при отсутствии агглютинации резус-фактор получает отрицательную отметку. Увидеть результат при появлении хлопьев эритроцитов можно без использования специального лабораторного оборудования.

Нюансы процедуры

Точность исследования ГК и резус-фактора с помощью цоликлонов очень высока, однако порой анализ выдает неправильные результаты: причиной является фактор человеческой ошибки, когда процедуру проводят с нарушениями.

Чтобы снизить риск такой ошибки, нужно помнить о следующих аспектах:

  • Цоликлоны хранятся в холодильнике, оптимальный температурный режим – +2… +8 градусов по Цельсию. Если флакон распечатан, его содержимое нужно использовать в течение 30 дней, крышка должна быть плотно завинчена. Реагенты очень чувствительны к внешним воздействиям и при несоблюдении правил хранения или по истечении срока теряют свои качества, что приводит к ошибкам.

В ходе процедуры можно отметить и реакции, способные ввести в заблуждение: например, замедленное склеивание происходит при воздействии второго реагента. Когда реакция затягивается, со временем жидкость подсыхает, что сопровождается естественным выпадением эритроцитов в осадок, поэтому этот результат не считается достоверным.

Также в ряде случаев отмечается оседание кровяных телец по краям: неопытные специалисты принимают эффект за склеивание, но в действительности это случается, если планшет оставили в неподвижном состоянии, наблюдая за реакцией. Только если поверхность слегка раскачивали, результат можно считать правильным.

Также определить группу может быть сложно, если пациент страдает от одной из болезней, изменяющих свойства кровяных телец. К таким заболеваниям относят проблемы печени, селезенки, пневмонию, ожоги различной степени, сепсис. Наличие таких болезней сильно обостряет способность эритроцитов выпадать в осадок, и панагглютинация наблюдается даже при воздействии физраствора.

С другой стороны, цоликлоны не вызовут агглютинацию, если пациент страдает лейкозом: при этой болезни кровяные тельца не реагируют даже на высокоактивные раздражители, такое же явление характерно для младенцев.

В этом случае анализ особенно труден, для максимально точного определения химического состава требуется провести дополнительные лабораторные исследования с использованием специального оборудования и других способов.

Определение группы крови цоликлонами

Определение группы крови и резус-фактора играет основополагающую роль в случаях, когда речь идет о спасении жизни человека. Именно по этой причине подобное исследование проводят всем пациентам в предоперационный период, беременным женщинам перед родами и во многих других ситуациях, которые могут потребовать срочного переливания. Существует несколько способов определения группы крови с использованием разных лабораторных реагентов, и один из них основывается на применении химических веществ под названием цоликлоны. Что же представляет собой определение группы крови цоликлонами и как проводится процедура?

Определение группы крови цоликлонами

Для чего проводится анализ?

Группа и резус-фактор – генетически обусловленные характеристики крови, которые наследуются от родителей и остаются неизменными на протяжении всей жизни человека. Классификация групп крови осуществляется, исходя из определенного набора биохимических параметров и состава антигенов, и насчитывает 4 основных группы. Переливание пациенту крови несовместимой группы или с другим резус-фактором несет с собой смертельную опасность – иммунная система начинает вырабатывать антитела против чужеродных клеток, которые атакуют и разрушают их. Именно по этой причине в ситуациях, которые несут с собой риск обширной кровопотери, необходимо точное определение принадлежности крови и резус-фактора как у донора, так и у реципиента.

Таблица групп крови и резус-факторов

Что такое цоликлоны?

Цоликлоны – это антитела, которые получают посредством технологий генной инженерии. Обычно для получения цоликлонов берутся лабораторные мыши – животным вводится специальный препарат, после чего производят забор жидкости из брюшной полости – именно она и содержит необходимые для проведения анализа вещества. С научной точки зрения, цилоклоны можно отнести к иммуноглобулинам М, которые способны реагировать с агглютиногенами – специфическими клетками, присутствующими на поверхности красных кровяных телец.

Именно агглютиногены, а точнее их типы, и служат основой для классификации групп крови: так, у носителей первой группы данные вещества отсутствуют, у обладателей второй имеются агглютиногены типа А и т. д. В ходе проведения процедуры определенные цоликлоны вступают в реакцию с разными типами агглютиногенов, что и позволяет определить группу крови пациента.

Группа крови и резус фактор – фото

Цоликлоны выпускаются в виде жидкости, разлитой во флаконы по 5 мл или 10 мл, причем каждый ее тип имеет специфические характеристики:

  • анти-А представляет собой жидкость красноватого цвета;
  • анти-В имеет синий оттенок;
  • анти-АВ (анти-D) – бесцветный прозрачный раствор.

Преимущество цоликлонов перед другими химическими реагентами заключается в том, что они не требуют специальной подготовки к анализу и позволяют провести его в кратчайшие сроки. Кроме того, они не являются клетками человеческого организма, поэтому инфекционное заражение медперсонала при контакте с веществами полностью исключено.

Определение групп крови по системе АВ0 при помощи цоликлонов Анти-А и Анти-В

Как проводится исследование?

Для определения группы крови с использованием цоликлонов необходима плоская ровная поверхность (планшетка), смоченная водой, набор химических реагентов и пробы биологической жидкости, причем специалист может использовать любую кровь: капиллярную, венозную, замороженную и т. д.

  1. Стороны планшета помечают, чтобы не перепутать, на какую из них будет нанесен тот или иной тип цоликлонов.

Процедура определения группы крови цоликлонами

Планшет для определения группы крови

Важно! Спустя несколько минут наступит реакция, по которой можно с высокой точностью определить принадлежность крови к определенной группе.

Интерпретация результатов

Интерпретация результатов процедуры проводится визуально – жидкости либо полностью соединяются, либо наступает склеивание (агглютинация) кровяных телец, вследствие чего биоматериал сворачивается и в нем образовываются мелкие хлопья.

Расшифровка осуществляется следующим образом:

  • если реакция отсутствует во всех образцах биоматериала, его можно причислить к I группе (это означает, что агглютиноген в клетках крови отсутствует);
  • вступление кровяных клеток в реакцию с цоликлоном анти-А свидетельствует о том, что кровь исследуемого человека относится к II группе;
  • склеивание эритроцитов с цоликлоном анти-В – признак III группы крови;
  • если биоматериал вступил в реакцию со всеми веществами, то он принадлежит к IV группе.

Исследуемая кровь группы О(I)

Для проверки точностии результатов и определения резус-фактора к образцам биоматериала добавляют цоликлон АВ – если произошла реакция агглютинации, он в крови определяется как положительный (отсутствие склеивания эритроцитов говорит об отрицательном резус-факторе). Чтобы исключить заболевания, при которых агглютинация происходит при контакте с любыми раздражителями, капля крови пациента смешивается с физраствором. В случаях, когда визуально определить результат невозможно, анализ переделывают, а образцы рассматривают под микроскопом.

Таблица. Реакции разных групп крови с цоликлоном анти-А и анти-В.

Цоликлон Анти-B флакон-капельница

Что следует учитывать при проведении анализа?

Чтобы результат анализа был максимально достоверным, при проведении процедуры необходимо соблюдать ряд условий:

  • реагенты должны храниться в холодном месте при температуре +2-8 градусов во флаконах с плотно закрученной крышкой (в случае нарушения правил хранения они быстро теряют свои свойства);
  • для проведения анализа нельзя использовать цоликлоны с истекшим сроком хранения (он составляет около 30 дней) или жидкости, которые содержат осадок, хлопья или мусор;
  • исследование выполняется в хорошо освещенном помещении при температуре воздуха не ниже +15 и не выше +25 градусов, причем в нем не должно быть грязи, пыли и других факторов, способных исказить результат;

Температура воздуха во время процедуры должна соответствовать

Процесс определения группы крови

Продолжительность реакции должна составлять не менее 3 минут, а при сомнительном результате время наблюдения за образцами биоматериала следует продлить до 5 минут. Однако по истечении 10 минут может произойти подсыхание биоматериала и естественное выпадение эритроцитов в осадок, поэтому доверять такому исследованию не стоит.

Что может повлиять на результат?

Цоликлоны чувствительны к факторам окружающей среды, соответственно, при проведении исследования необходимо соблюдать температурный режим и правила гигиены – помещение должно быть чистым и сухим, а отдельные образцы крови не должны контактировать друг с другом. Кроме того, при некоторых патологиях кровь человека способна менять свои характеристики, вследствие чего проведение исследования существенно усложняется. Так, при дисфункции печени, селезенки, септических процессах и обширных ожогах у пациентов наблюдается так называемая панагглютинация крови – эритроциты выпадают в осадок даже при реакции с физраствором. У больных лейкозом и новорожденных младенцев наблюдается иная картина – кровяные тельца не реагируют на раздражители, из-за чего отследить реакцию склеивания становится невозможно.

Что влияет на результаты процедуры

Обратите внимание! Кроме того, у близнецов, людей с пересаженным костным мозгом или у тех, кто перенес неоднократное переливание крови, в биологических жидкостях уживаются разные типы эритроцитов – соответственно, при проведении анализа наблюдаются непредсказуемые результаты. Для определения группы в вышеперечисленных случаях требуются дополнительные лабораторные анализы с использованием специального оборудования.

Анализ с использованием цоликлонов – один из наиболее простых и точных способов определения группы крови человека. При соблюдении всех правил и условий проведения процедуры вероятность ошибочного результата сводится к минимуму, поэтому химические реагенты данного типа применяются практически во всех современных лабораториях.

This article was written by admin

×